ВЗАИМОСВЯЗЬ НАРУШЕНИЙ В РЕЦЕПТОРНОМ АППАРАТЕ ТРОМБОЦИТОВ К ТРОМБОПОЭТИНУ И РАЗВИТИЯ ТРОМБОЦИТОПЕНИИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С
Пшеничная Н.Ю. 1, Кузнецова Г.В. 1, Колпаков Д.С. 2
1. ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
2. Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Многие аспекты патогенеза тромбоцитопении при ХГС остаются до конца не изученными. Так, например, уменьшение выработки тромбопоэтина и снижение его активности вследствие снижения функциональной активности гепатоцитов при ХГС является доказанным [5], однако роль рецепторов к тромбопоэтину в патогенезе развития тромбоцитопении при ХГС до настоящего времени еще не изучалась [1, 4, 6, 8].
Основным регулятором процесса образования тромбоцитов является тромбопоэтин, в основном вырабатываемый клетками печени. В плазме крови он частично связывается с рецепторами с-Mpl, расположенными на тромбоцитах, а оставшаяся его часть оказывает стимулирующее влияние на пролиферацию мегакариоцитов в костном мозге. Синтез данных рецепторов кодируется геном Mpl [3]. У больных ХГС вследствие снижения функциональной активности гепатоцитов имеет место уменьшение выработки тромбопоэтина и снижение его активности [5]. С другой стороны, в гене Mpl описаны частые соматические мутации W515L иW515K, которые в гетерозиготном состоянии приводят к возникновению эссенциальной тромбоцитемии. Точковая мутация тромбопоэтинового рецептора встречается у 5–10 % больных с эссенциальной тромбоцитопенией [2, 7]. Поэтому механизм развития тромбоцитопении у больных ХГС, возможно, связан не только со снижением синтеза тромбопоэтина в печени, но и с дефектом экспрессии рецептора с-Mpl на тромбоцитах.
Оценка функциональной активности тромбоцитов, а именно состояния их рецепторов к тромбопоэтину, позволила бы более углубленно оценить механизмы формирования тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С и расширить современные представления о патогенетических аспектах этого заболевания.
Целью исследования явилось определение выраженности мутаций в рецепторах тромбоцитов к тромбопоэтину, а также установление взаимосвязи исследуемых показателей с развитием тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С.
Материалы и методы исследования
Объектом настоящего исследования явились больные ХГС, находившиеся на обследовании и лечении в условиях инфекционного боксированного отделения для взрослых № 4 МБУЗ ГБ№ 1 им. Н.А. Семашко г. Ростова-на-Дону.
В исследование вошли 58 больных с ХГС (РНК НCV+), не леченных ранее с использованием комбинированной противовирусной терапии, со степенью фиброза по данным непрямой эластометрии печени не выше F2 и отсутствием явных клинико-лабораторных признаков аутоиммунных заболеваний. Пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от наличия (n1 = 29) или отсутствия у них тромбоцитопении (n2 = 28). По основным клинико-лабораторным параметрам (возраст, пол, активность АлАт и АсАт, генотип вируса, уровень виремии, степень выраженности фиброза) группы оказались практически идентичными, что позволило провести их дальнейший статистический анализ. В группу сравнения вошли практически здоровые лица в возрасте от 22 до 55 лет (n3 = 32).
Во всех группах проводилось количественное определение частоты мутаций в гене Mpl (W 515L и 515К), кодирующего с-Mpl рецептор тромбоцитов к тромбопоэтину, с предварительным выделением ДНК тромбоцитов, осуществлялось с помощью количественной ПЦР в реальном времени (RQ-PCR)по технологии TagMAN с использованием Mpl W 515L и 515К-тестов производства «ГеноТехнология». Определялось исходное число копий нормального гена и число копий гена с мутацией W 515L и 515К. Все исследования выполнялись в лаборатории на базе ФБУН «РостовНИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора.
Результаты исследованияи их обсуждение
Состояние с-Mpl рецепторов тромбоцитов к тромбопоэтину при ХГС
Функциональное состояние с-Mpl рецепторов тромбоцитов к тромбопоэтину оценивали по частоте и экспрессии соматических мутаций W515L и W515K в гене Mpl. В группе здоровых лиц, также как и у больных ХГС обеих групп, точковые мутации W515L и W515K встречались практически с одинаковой частотой (рисунок). Их выявление свидетельствовало о возможной предрасположенности к развитию тромбоцитопении. Доминировала во всех группах мутация W515L, составляя соответственно 69,2 % от суммарной частоты встречаемости обеих мутаций у больных ХГС с тромбоцитопенией, 71,4 % у больных ХГС без тромбоцитопении 76,9 % у здоровых лиц.
Частота выявления соматических точковых мутаций W 515L и W 515К гена Mpl в исследуемых группах
Таким образом, различий в частоте встречаемости и типе соматической мутации гена Mplво всех исследуемых группах не обнаружено. Вместе с тем совершенно иные данные были получены при изучении степени экспрессии точковых мутаций у здоровых лиц и больных ХГС. Интенсивность мутации оценивалась по частоте замены аминокислоты триптофан в положении W515 на лейцин (W515 L) или лизин (W515 K) и выражалась в процентах. Мутация в пределах 0,0001–1,0 % считалась слабой, от 1,0–50 % – средней и свыше 50 % – сильной мутацией (таблица).
Выраженность соматических мутаций гена Mpl у больных в исследуемых группах (абс./ Х ± S, %)
Больные исследуемых групп с мутациями гена Mpl
Выраженность мутации
W515L
W515K
Здоровые лица, n = 13
0,0001 % – 1,0 % (1)
8/61,5 ± 14,0
3/23,07 ± 12,1
< 1,0–50 % (2)
1/7,7+7,7
0/0+7,7
> 50 % (3)
1/7,7 ± 7,7
0/+7,7
Б-е ХГС без тромбоцитопении, n = 14
0,0001 % – 1,0 % (4)
1/7,14 ± 7,14
0/0+7,14
< 1,0–50 % (5)
3/21,4 ± 11,3
1/7,14 ± 7,14
> 50 % (6)
6/42,8 ± 13,7
3/21,4 ± 11,3
Б-е ХГС с тромбоцитопенией n = 13
0,0001 % – 1,0 % (7)
1/7,6 ± 7,6
1/7,6 ± 7,6
< 1,0–50 % (8)
2/15,3 ± 10,3
1/7,6 ± 7,6
> 50 % (9)
6/46,1 ± 14,3
2/15,3 ± 10,3
p 1–4
< 0,05
> 0,05
p 1–7
< 0,05
> 0,05
p 2–5
> 0,05
> 0,05
p 2–8
> 0,05
> 0,05
p 5–8
> 0,05
> 0,05
p 3–6
< 0,05
> 0,05
p 3–9
< 0,05
> 0,05
Оказалось, что в обеих группах больных ХГС (как с тромбоцитопенией, так и без таковой), значительно чаще, чем у здоровых лиц, встречалась сильная мутацияW515L (46,1 ± 14,3 и 42,8 ± 13,7 % против 7,7 ± 7,7 % соответственно, p < 0,05). В отношении мутации W515К прослеживалась та же тенденция, но в связи с тем, что она встречалась значительно реже, достоверных отличий в исследуемых группах установить не удалось.
Полученные данные дают основание предполагать, что вирус гепатита С, попадая в организм человека, может усиливать мутацию гена Mpl, кодирующего рецепторы тромбопоэтина у лиц, уже имевших ранее точковые мутации W515L или W515К.
Под воздействием вируса слабая мутация может трансформироваться в выраженную и снижать опосредованное через c-Mpl рецептор связывание тромбоцитов с тромбопоэтином. В этом случае теоретически более значительное количество тромбопоэтина должно идти на стимуляцию пролиферации мегакариоцитов в костном мозге, но в связи с тем, что синтез тромбопоэтина в печени при ХГС снижен [5, 9], стимулирующий эффект по принципу «обратной связи» практически оказывается нивелированным. Объяснимо и отсутствие разницы в частоте выявления выраженных мутаций в группе больных с тромбоцитопенией и без таковой. В данном случае вирус способствует увеличению количества клеток, несущих данные мутации, усиливая выраженность дефектов в рецепторном аппарате тромбоцитов к тромбопоэтину. Проявятся ли эти нарушения клинически, иными словами, разовьется ли у данного конкретного пациента с ХГС тромбоцитопения, зависит не только от выраженности экспрессии данных точковых мутаций гена Мpl, но и от множества других эндогенных факторов, вносящих вклад в развитие тромбоцитопении.
У больных ХГС с тромбоцитопенией отмечались также изменения в коагулограмме. В 86,2 ± 6,52 % случаев (25 больных) эти сдвиги проявлялись в виде удлинения протромбинового времени до 12,20 ± 0,37 с и в 41,38 ± 9,31 % (12 больных) – снижения АЧТВ до 31,50 ± 0,54 с. У всех этих пациентов выявлялись антитела к рецепторам тромбоцитов. Следует отметить, что у больных со сниженным АЧТВ зарегистрировано и удлинение протромбинового времени.
У больных ХГС без тромбоцитопении указанные изменения протромбинового времени и АЧТВ регистрировались соответственно в 21,42 ± 7,90 % (6 больных) и 14,29 ± 6,74 % (4 больных) случаях, что было существенно меньше, чем у пациентов с тромбоцитопенией (p < 0,05 и p < 0,01 соответственно).
Заключение
Под влиянием вируса гепатита С экспрессия точковых мутаций W515L и W515К гена Mpl может усиливаться. Дефект экспрессии рецептора с-Mpl на тромбоцитах приводит к нарушению связывания тромбопоэтина, что в свою очередь ведет к снижению образования тромбоцитов. Вследствие этого наличие точковых мутаций в данном гене у больных ХГС можно рассматривать как один из прогностических факторов по развитию тромбоцитопении.
Рецензенты:
Харсеева Г.Г. д.м.н., профессор, зав.кафедрой микробиологии и вирусологии № 2, ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава РФ, г. Ростов-на-Дону;
Яговкин Э.А. д.м.н., с.н.с. заместитель директора Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии, г. Ростов-на-Дону.
Работа поступила в редакцию 17.04.2013.
2. Соколова Н.А. Изменения в представлении о патогенезе Ph-негативных миелопролиферативных заболеваний / Н.А. Соколова, М.И. Савина // Молодой ученый. – 2011. – № 5. – Т.2. – С. 216–219.
3. Andrew I. Schafer Thrombocytosis/I.Andrew Schafer // N Engl J Med. – 2004. – № 3. – Р. 1211.
4. Fitzgerald L.A., Philips D.R. Platelet membrane glycoproteins / L.A. Fitzgerald, D.R. Philips, R.W. Colman, J. Hirsh, V.J. Marder, E.W. Saizman // Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical Practice. JB Lippincott, Philadelphia. – 2nd ed. – 1987. – P. 572–593.
5. Fujii H.Life-threatening severe immune thrombocytopenia during alpha-interferon therapy for chronic hepatitis C/H.Fujii ,T.Kitada , T.Yamada , et al. // Hepatogastroenterology. – 200. – № 50. – Р. 841–842.
6. Hynes R.O. Integrins: a family of cell surface receptors / R.O. Hynes // Cells. – 1987. – Vol 48. – P. 549–554.
7. Passamonti F. Clinical relevance of JAK2 (V617F) mutant allele burden / F. Passamonti, E. Rumi // Haematologica. – 2009. – Vol. 9, № 1. – Р. 7–10.
8. Smyth S.S., Joneckis C.C., Parise L.V. Regulation of vascular integrins. / S.S. Smyth, C.C. Joneckis, L.V. Parise // Blood. – 1993. – Vol. 81. – P. 2827–2843.
9. Weksler B.B. Review article: the pathophysiology of thrombocytopenia in hepatitis C virus infection and chronic liver disease // AlimentPharmacolTher. – 2007. – № 26. – P. 13–19.
Пшеничная Н.Ю., Кузнецова Г.В., Колпаков Д.С. ВЗАИМОСВЯЗЬ НАРУШЕНИЙ В РЕЦЕПТОРНОМ АППАРАТЕ ТРОМБОЦИТОВ К ТРОМБОПОЭТИНУ И РАЗВИТИЯ ТРОМБОЦИТОПЕНИИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 7 (часть 2). – стр. 375-378;
URL: www.rae.ru/fs/?section=content&op=show_article&article_id=10001052 (дата обращения: 28.11.2013).