главная / Статьи / Вирусные болезни / Серологическая диагнистика аденовирусного гепатита с включениями – гидроперикардита кур

Серологическая диагнистика аденовирусного гепатита с включениями – гидроперикардита кур

В.А. Бакулин, д.в.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГУ ВПО С.-Пб.ГАВМ, главный научный сотрудник отдела вирусологи ГНУ ВНИВИП; А.С. Дубовой, главный научный сотрудник отдела вирусологи ГНУ ВНИВИП.

Семейство Adenoviridae объединяет большую группу вирусов поражающих животных, птиц и людей. В состав семейства входит два рода. Род Mastadenovirus включает аденовирусы млекопитающих: человека – 47 серотипов, обезьян – 27 серотипов, КРС – 10, овец – 6, свиней – 4, собак – 2, лошадей – 1, коз – 1. Род Aviadenovirus представлен аденовирусами птиц, в том числе кур – 13 серотипов, индеек – 3, уток – 2, фазанов – 1. Антигеннородственные аденовирусы выделены также от перепелов, гусей, голубей, куропаток, цесарок, дроздов, лебедей, попугаев и других видов декоративных и диких птиц. Аденовирусы птиц условно дифференцированы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например возбудители «CELO-инфекции», бронхита перепелов, панкреатита цесарок, гепатита с включениями-гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемагглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе аденовирус «Синдрома снижения яйценоскости-76(ССЯ-76). В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп – аденовирусы геморрагического энтерита индеек и болезни «мраморной селезенки» фазанов. В промышленных птицехозяйствах аденовирусы распространены повсеместно. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внешне здоровой птицы. Цыплята не имеющие каких-либо признаков заболевания, но зараженные аденовирусом способны выделять его во внешнюю среду около 7 месяцев. Имеются случаи изоляции аденовирусов от клинически здоровых 4–5-летних кур. Обычно контакт птиц с аденовирусами завершается развитием субклинической патологии, с поражениями органов, выявляемыми только при гистологическом исследовании. Но в последнее время аденовирусная инфекция на цыплятах и, реже, курах проявляется в виде синдрома «гепатита с тельцами включениями – гидроперикардита», с высокой смертностью птиц.

Аденовирусный гепатит с включениями-гидроперикардит (АДВГГ) – широко распространенная болезнь кур, наносящая значительный социально-экономический ущерб промышленному птицеводству и дестабилизирующая эпизоотическую ситуацию по другим инфекционным заболеваниям. Поражение аденовирусом различных жизненно важных систем организма птиц, пагубно влияет на развитии цыплят, повышает их восприимчивость к другим инфекционным заболеваниям и усиливает проявление патологий незаразного происхождения. При экспериментальном парэнтеральном заражении СПФ-цыплят гепатит с тельцами-включениями можно воспроизвести используя любой из 12 известных серотипов аденовирусов птиц первой группы. Научно-обоснованная система и средства диагностики АДВГГ нуждаются в дополнительных исследованиях и постоянной доработке.

В связи с этим перед исполнителями была поставлена следующая задача: усовершенствовать, разработанные во ВНИВИП наборы компонентов для диагностики АДВГГ в реакции дифузионной преципитации и проверить их эффективность их в комиссионных испытаниях.

В ходе исследований оптимизирована схема получения антигенов аденовирусов птиц 1-го и 4-го серотипов для постановки РДП. Для накопление аденовируса 1-го серотипа (штамм Фелпс) наиболее оптимальны следующие режимы: заражение развивающихся эмбрионов кур 9 дневного срока инкубации в аллантоисную полость, 96 часов инкубации при (37,0±0,5)0С. В качестве материала использовали экстраэмбриональную жидкость и ХАО. Для получения аденовируса 4-го серотипа (штамм «Т-12») использовали цыплят 10-дневного возраста. Вируссодержащим материалом служил гомогенат печени экспериментально зараженных цыплят павших на протяжении трех суток.

Выбраны наиболее технологичные и эффективные схемы гипериммунизации цыплят для получения высокоактивных специфических сывороток. Для аденовирусов как 1 серотипа (штамм Фелпс), так и 4 серотипа (штамм «Т-12») наиболее оптимальными оказались две следующие схемы иммунизации позволяющие получить сыворотки с активностью в РДП 1:32 и выше.

Схема № 1: парэнтеральное введение живого вируса, через 21–28 дней одно или двухкратная иммунизация инактивированным вирусом в эмульсионной форме. Схема №2: парэнтеральное введение инактивированного вируса (только антигена), через 21-28 дней одно– или двухкратная иммунизация инактивированным вирусом в эмульсионной форме.

Проведено определение титров антигенов и сывороток (по отдельности для каждого серотипа аденовируса), исходя из чего, выбран оптимальный вариант объединения антигенов с одинаковыми титрами, а также и сывороток (с одинаковыми титрами и в равных объемах).

Отработана постановки РДП с объединенными как антигенами 1-го и 4-го серотипов, так и с объединенными гипериммунными сыворотками с целью повышения эффективности разрабатываемого диагностикума.

Выбрана оптимальная схема постановки реакции с полученными компонентами и разработана комплектация набора. Наработан и испытан в Комиссионных внутриинститутских испытаниях (ГНУ ВНИВИП) набор компонентов для диагностики АДВГГ в реакции дифузионной преципитации.

В набор входят:
1. смесь атнигенов аденовируса птиц 1 и 4 серотипов – 3 ампулы объемом 1 мл;
2. смешанная гипериммунная сыворотка к аденовирусам 1 и 4 серотипов – 1 ампула 1 мл;
3. отрицательный антиген – смесь надосадочной жидкости гомогената печени интактного (здорового цыпленка) и аллантоисной жидкости незараженного развивающегося эмбриона 10-дневного возраста;
4. отрицательная сыворотка 1 ампула 1 мл;
5. солевая смесь, состоящая из хлористого натрия – 8 г. и высокоочищенного агара Дифко.

Таким образом, выбран оптимальный режим получения антигенов аденовирусов птиц 1-го и 4-го серотипов в титрах до 1:32 и выше для постановки РДП. Отработаны схемы гипериммунизации цыплят для получения высокоактивных (в титрах до 1:32) специфических сывороток, на аденовирусы как 1-го, так и 4-го серотипов для РДП.

Выбрана оптимальная схема постановки РДП с полученными компонентами и разработана комплектация набора компонентов для диагностики аденовирусного гепатита-гидроперикардита (АДВГГ) кур, в реакции диффузионной преципитации (РДП).

Изготовлены и исследованы в лабораторных условиях две экспериментальные серии набора специфических компонентов для диагностики аденовирусного гепатитагидроперикардита (АДВГГ) кур в (РДП) реакции диффузионной преципитации.

Подготовлено по материалам «Vого Международного Ветеринарного Конгресса по Птицеводству» для webmvc.com